«Практическая эмбриология в клинике вспомогательных репродуктивных технологий» (с отработкой практических навыков по эмбриологическим процедурам в программах экстракорпорального оплодотворения)

Строение и функция семенников, аномалии развития. Сперматогенез и его гормональная регуляция. Строение сперматозоида на разных этапах его развития.

Обследование мужчин перед проведением цикла ВРТ: интерпретация результатов осмотра уролога-андролога, анкетирования, лабораторного, генетического и ультразвукового обследования.

Методы получения и обработки сперматозоидов. Получение и подготовка сперматозоидов, полученных после чрезкожной аспирации эпидермальных сперматозоидов (PESA), аспирации и экстракции 7 тестикулярных сперматозоидов (TESA и TESE), после процедуры ретроградной эякуляции. Контроль качества медицинской помощи в кабинете андролога.

Проведение спермограммы. Основные параметры спермограммы. Исследование эякулята на антиспермальные антитела. Биохимическое исследование эякулята. Функциональные тесты сперматозоидов: взаимодействие с цервикальной жидкостью; пенетрационные тесты оболочки Zona pellucida. Оценка морфологии сперматозоидов. Принципы безопасной работы с эякулятом. Параметры комъютеризированной спермограммы.

Фрагментация ДНК у сперматозоидов, методы определения фрагментации ДНК и интерпретация результатов. Функциональные тесты на определение фрагментации ДНК.

Методы подготовки сперматозоидов для IVF и внутриматочных инсеминаций.

Замораживание сперматозоидов. Техника аппаратного и мануального замораживания.

Яичники и гормональная регуляция их функции. Роль гипофиза в регуляции функции яичников. Физиология циклических изменений эндометрия. Фолликулогенез. Овогенез. Мейоз. Различия между мейотическим и митотическим делением клетки.

Физиология беременности. Принципы контрацепции. Биологическое и репродуктивное старение. Менопауза.

Основные виды вспомогательных репродуктивных технологий и их особенности: IUI, IVF, PGD. Показания и противопоказания к различным программам ВРТ.

Структура и особенности функционирования IVF лабораторий. Основное оборудование современных лабораторий, его характеристика и производители. Основные системы, используемые в IVF лабораториях для проведения анализа спермограмм, ICSI, вспомогательного хэтчинга, системы визуализации веретена деления гамет, видеосистемы в IVF лаборатории, наблюдение развития эмбрионов в закрытых системах культивирования, электронные базы данных.

Микроскопы и их разновидности. Основные требования при микроскопии. Производители и поставщики микроскопов. Возможности световой, конфокальной, флюоресцентной, сканирующей и электронной микроскопии.

Принципы работы и структура лаборатории высокого риска при лечении пациентов , инфицированных вирусными гепатитами и ВИЧ. Инфекции, приводящие к бесплодию, методы их диагностики.

Экстракорпоральное оплодотворение (in vitro fertilization, IVF). Контролируемая стимуляция яичников в протоколах IVF: методы и их отличия. Циклы IVF с применением агонистов и антагонистов гонадотропин релизинг гормона. Показания, ограничения и противопоказания к проведению IVF. Осложнения IVF.

Аспирация фолликулярной жидкости и выделение яйцеклеток (ovum pick up, OPA). Процедура инсеминации яйцеклеток in vitro при стандартном IVF. Процесс оплодотворения: клеточные и молекулярные механизмы взаимодействия гамет. Блок полиспермии. Формирование зиготы и морфология на пронуклеарной стадии. Развитие эмбриона на ранних стадиях, активация генома эмбриона. Механизм анеуплодии у эмбрионов и ее роль в развитии эмбриона.

Принципы и методы культивирования гамет и эмбрионов. Требования к культивированию эмбриона во время раннего развития in vitro. Схема культивирования для IVF/ICSI. Техника культивирования до стадии бластоцист. Расходные материалы для препарирования гамет и культивирования эмбрионов. Культуральные среды для IVF. История развития культуральных сред. Основные производители культуральных сред и различия в их составе. Основные свойства культуральных сред (рН, осмолярность), буферные системы и биологически активные добавки в культуральные среды. Стандартные протоколы культивирования эмбрионов с использованием сред различных производителей.

Селекция эмбрионов для переноса и замораживания. Оценка морфологии эмбрионов in vitro. Оценка морфологии морул и бластоцист. Сравнение эффективности переноса на стадии деления и бластоцист. Компъютеризированный мониторинг развития эмбрионов in vitro. Морфология и функция эндометрия. Подготовка эндометрия к имплантации эмбриона в протоколах ЭКО.

История развития методов микроманипуляций. Молекулярные основы активации ооцитов. Внутриплазматическое введение сперматозоидов (ICSI). Показания к ICSI: абсолютные и относительные. Оборудование для ICSI: микроскопы и оптика; микроманипуляторы и шприцы разных производителей. Пипетки для микроманипуляций и их особенности у разных производителей. Критерии выбора пипеток для проведения ICSI.

Особенности техники препарирования сперматозоидов для ICSI. Декоронизация (денюдирование) ооцитов и оценка стадии их зрелости. Техника проведения ICSI. Факторы, влияющие на результат ICSI. Оценка качества исполнения процедуры ICSI: принципы самоконтроля.

Отсутствие оплодотворения в протоколах IVF и ICSI: причины и профилактика. Искусственная активация ооцитов после ICSI. Альтернативные способы селекции сперматозоидов для ICSI. Генетические аспекты ICSI: генетическое обследование пациентов перед ICSI (кариотипирование, исследование на делеции Y-хромосомы, мутации CFTR гена).

Вспомогательный хэтчинг (АНА). Техники вспомогательного хэтчинга: механический, химический, лазерный. Показания и эффективность к различным видам хэтчинга. Искусственное извлечение фрагментов из 12 эмбриона, показания и техника. Искусственное уменьшение полости бластоцисты (АС) перед витрификацией: техника и клинические результаты.

Циклы ЭКО с применением метода созревания яйцеклеток in vitro (IVM). Техника IVM. Культивирование овариальной ткани in vitro. Культуральные среды и методы культивирования овариальной ткани.

Основы криобиологии. Криопротектанты, используемые в ВРТ. Новые поколения криопротектантов. Оборудование для замораживания. Программируемые замораживатели и протоколы замораживания. Метод витрификации. Витрификация эмбрионов. Витрификация ооцитов. Оценка эффективности витрификации различными методами и с использованием различных носителей.

Перенос размороженных эмбрионов (FET) в естественном и стимулированном циклах. Клиническая эффективность витрификации эмбрионов и бластоцист. Микроманипуляции после замораживания эмбрионов. Сохранение фертильности. Замораживание овариальной ткани перед проведением радио- и химиотерапии. Проблема сохранения фертильности у мальчиков. Создание банков замороженной спермы и эмбрионов для пациентов. Международные криобанки. Документация, необходимая для работы криобанков донорских спермы и ооцитов.

Донация гамет и эмбрионов. Показания для использования донорских сперматозоидов. Требования и селекция доноров спермы. Регистрационная информация, необходимая для донорских банков. Криохранение биологических материалов высокого риска (от пациентов с гемаконтактными вирусными гепатитами и ВИЧ). Донация ооцитов. Показания к использованию донорских ооцитов. Лабораторное обследование доноров и реципиентов ооцитов. Организация, показания и техника использования донорских эмбрионов. Клиническая эффективность использования донорских гамет и эмбрионов.

Молекулярная генетика эукариотической клетки: структура и функция DNA. Строение и функция хромосом и генов. Количественные и структурные хромосомные аберрации, делеции и транслокации. Их роль в развитии эмбриона. Врожденные генетические дефекты. Мозаицизм. Биология генных мутаций: точечные мутации делеции гена, генные инверсии.

Принципы и техники предимплантационного генетического тестирования (ПГТ). Показания и противопоказания. Техника анализа с использованием различных технологий. Эффективность и проблемы методов. Интерпретация результатов. Диагностика нумерических и структуральных аберраций хромосом. Предимплантационная диагностика моногенных заболеваний с использованием ПЦР анализа.

Техника биопсии бластомеров. Лабораторная и клиническая эффективность метода. Влияние биопсии на последующее развитие эмбриона и плода. Эмбриональный мозаицизм. Техника биопсии полярных тел. Клиническая эффективность метода. Техника биопсии трофектодермы. Роль митохондриальной ДНК в репродукции. Вариабельность мутаций митохондриальной ДНК и врожденные заболевания, связанные с ними. Экспериментальные данные о митохондриальной терапии: перенос ооплазмы, аутотрансплантация митохондрий (AUGMENT), пересадка ядра, веретена деления, пронуклеусов.

Организация системы качества в IVF лаборатории. Внутренний контроль качества и медицинской безопасности в IVF лаборатории. Документооборот по внутреннему контролю качества и медицинской безопасности в IVF лаборатории. Оборудование для проведения мониторинга основных показателей функционирования оборудования эмбриологической лаборатории: температуры, влажности, концентрации СО 2. Формы журналов, вкладышей в медицинскую карту для оформления результатов мониторинга функционирования лабораторного оборудования.

Знакомство с международными стандартами ISO. Требования при сертификации клиник ВРТ. Аккредитация сотрудников эмбриологической лаборатории клиники ВРТ. Стандартные операционные процедуры (СОП) и алгоритмы в эмбриологической лаборатории клиники ВРТ.

Идентификация пациентов в клинике ВРТ. Идентификация биоматериала на эмбриологическом этапе протоколов ЭКО: преимущества и недостатки различных методов.