Набор dsDNA ELISA для определения двухцепочечной ДНК

Системная красная волчанка (SLE) характеризуется циркуляцией аутоиммунных антител класса IgG против определенных внутриклеточных мишеней, включая двухцепочечную ДНК (dsDNA), U1-рибонуклеопротеиды (RNPs), антиген Смита (Sm), гистоны, ядерный антиген пролиферирующих клеток (PCNA) и рибосомные фосфопротеины (Rib-P). На сегодняшний день описано более 100 разных антигенов, являющихся мишенями аутоиммунных антител в сыворотке крови людей, больных системной красной волчанкой. Антитела к двухцепочечной ДНК являются известным чувствительным и специфичным маркером для определения системной красной волчанки. Антитела к двухцепочечной ДНК можно обнаружить у 20-70% людей, больных системной красной волчанкой, в зависимости от используемой тест-системы, генетического фона и состава исследуемой группы пациентов. Титр антител к двухцепочечной ДНК коррелирует с активностью болезни у пациентов. В редких случаях антитела к двухцепочечной ДНК выявляются у пациентов с родственными заболеваниями соединительной ткани или с вирусными инфекциями.

Описание Набор dsDNA ELISA каталожный номер 25005, предназначен для полуколичественного определения специфических антител к двухцепочечной ДНК, методом твердофазного иммуноферментного анализа. Результаты теста на антитела к двухцепочечной ДНК помогают диагностировать системную красную волчанку и родственные заболевания.

Принцип работы набора

Метод - твердофазный иммуноферментный анализ. Поверхность лунок микропланшета покрыта слоем с рекомбинантной двухцепочечной ДНК. Сначала в микротитровальные лунки вносят разведённые образцы пациента, контроли и калибратор. Это приводит к связыванию антител к двухцепочечной ДНК с иммобилизованным антигеном двухцепочечной ДНК. После промывания добавляют конъюгат пероксидазы хрена (HRP) с антителами класса IgG, который связывается с антителами к двухцепочечной ДНК. Несвязанное вещество удаляется при проведении другого цикла промывания. В конце, связывание антител к двухцепочечной ДНК визуализируют посредством инкубации с субстратом ТМБ (тетраметилбензидин). Оптическую плотность измеряют спектрофотометрически на длине волны 450 нм.

Состав набора

Набор реагентов dsDNA ELISA на 96 определений. В набор входят стрипы для микротитрования с нанесенными антигенами, коньюгат пероксидазы хрена (HRP) с антителами класса IgG, промывочный буфер, ТМБ субстрат, стоп-раствор (0.5 M H2SO4), буфер для разведения, калибратор, отрицательный контроль, положительный контроль.

Аналитические характеристики набора

Широкий диапазон измерений с низкой границей обнаружения от 0.1 до 10 относительных единиц. Один калибратор для всех параметров. Рекомбинантный антиген. Продолжительность исследования < 1,5 часа, небольшой инкубационный период (30 мин/30 мин/15 мин). 3 мкл сыворотки или плазмы на каждый тест. Система обнаружения HRP/TMB (OD 450nm/620nm). Готовые к использованию реагенты с цветной кодировкой. Ломкие стрипы для микротитрования. Объём набора 96 определений. Хранение при температуре 2-8°C. Сроки годности до двух лет. Логотип CE.

Показатели результативности

Высокая корреляция с эталонными ИФА наборами и с помощью непрямого метода иммунофлюоресценции на субстрате Crithidia luciliae. Превосходное «lot to lot» (от партии к партии) соответствие R² > 0,95. Низкая вариативность в пределах и за пределами тестирования VK% < 10. Высокая линейность по всей области измерений.

Клинические значения

Присутствие антитела к dsDNA (двуспиральная ДНК) высокоспецифично для системной красной волчанки (СКВ), реже и в более низкой концентрации они встречаются при других диффузных болезнях соединительной ткани или лекарственно-индуцированной СКВ. Предполагается непосредственное участие анти-дс ДНК IgG антител в патогенезе развития васкулитов и волчаночного нефрита. Уровень данных антител у пациентов с СКВ прямо коррелирует с концентрацией IgG-содержащих циркулирующих комплексов (ЦИК), они присутствуют в повышенной концентрации в почечных клубочках у больных СКВ при тяжёлой почечной патологии.