Specific IgE REAST

Определение Специфических IgE с биотинилированными жидкофазными аллергенами

Наборы нового поколения Specific IgE REAST с биотинилированными жидкофазными аллергенами для количественного определения содержания концентраций специфических IgE-антител в человеческой сыворотке или плазме методом реверсивного иммуноанализа REAST (реверсивный аллергосорбентный тест) исключают интерференцию аллерген-специфических антител других классов, что значительно повышает точность, специфичность и воспроизводимость метода. При первичной инкубации образца происходит захват только иммуноглобулинов класса E твердофазными моноклональными анти-IgE антителами, в результате чего исключается получения ложноотрицательных результатов анализов. Широкий спектр, более 770 исследуемых моно (индивидуальных) аллергенов и наличие 170 разнообразных микстов (смесей аллергенов) даёт уникальную возможность подбора аллергенов для каждого пациент индивидуально. Жидкие, стабильные и готовые к применению реагенты и аллергены исключают ошибки при разведении. Измерение оптической плотности проводится на любом современном плашечном спектрофотометре вертикального сканирования. Возможность использования автоматических ИФА анализаторов позволяет выполнить большой объём исследований.

Длительные сроки годности аллергенов и реагентов создают основу для рационального планирования закупок, контроля за запасами, дают возможность увеличения списка тестируемых аллергенов, за счёт приобретения редких аллергенов не опасаясь финансовых потерь. Результатом подобной концепции будет улучшение оперативного управления материалопотоком, сокращение сроков доставки, ускорение оборота и получения экономии.

Назначение набора Реверсивный аллергосорбентный тест на специфические IgE (Specifi c IgE REAST) предназначен для количественного определения специфических IgE в сыворотке или плазме человека. Результаты учитываются при диагностике аллергии I типа. Характерной особенностью аллергии I типа является участие аллерген-специфических иммуноглобулинов (антител) класса E (sIgE). Поэтому выявление специфических IgE является важным средством современной диагностики аллергии.

Реагенты необходимые для проведения анализа

Тест-системы, доступны в двух форматах каталожный номер 0520960FL на 96 определений и каталожный номер 0524800FL на 480 определений; Набор калибровочных проб (стандартов) каталожный номер 07050FL; Положительный контроль каталожный номер 07005; Отрицательный контроль каталожный номер 07006; Биотинилированные жидкие аллергены, рекомбинантные и нативные аллергены каталожные номера определяются комбинацией код - № аллергена - FL (из общего перечня аллергенов); Дополнительно при работе с контролями необходим флакон аллергена d1-FL относительно которого стандартизированы контроли.

Принцип работы набора

Количественное определение IgE осуществляется иммуноферментным методом (сэндвич-вариант). На этапе первой инкубации все IgE-антитела, присутствующие в сыворотке пациента, связываются с анти-IgE-антителами, которыми сорбированы ячейки планшета. Несвязавшиеся компоненты сыворотки удаляются промывкой, тогда как IgE-антитела остаются связанными с твёрдой фазой. На этапе следующей инкубации добавляют биотинилированный аллерген и инкубируют в ячейках планшета. После следующего этапа промывки проводят детектирование связанного аллергена, используя конъюгат стрептавидин-пероксидаза хрена, образующий комплексы из специфического IgE/биотинилированного аллергена/конъюгата с пероксидазой хрена. Лунки снова промывают, добавляют раствор 3,3’,5,5’-тетраметилбензидинового ТБМ субстрата и инкубируют с получением в итоге синего цвета. Ферментная реакция останавливается добавлением 25% фосфорной кислоты, цвет меняется на желтый. Оптическую плотность (ОП) окрасившегося продукта измеряют спектрофотометрически на длине волны 450 нм (эталонная длина волны 620 нм). Концентрация специфических IgE в образце пациента пропорциональна оптической плотности. Калиброванные стандарты с известным содержанием IgE-специфических антител (калиброванные по Международному Стандарту ВОЗ 75/502) анализируют одновременно с образцами пациента для получения калибровочной кривой. Неизвестные концентрации IgE в анализируемых образцах рассчитывают по данной кривой.

Состав компонентов набора

• Тест-системы на 96 и 480 определений, в тест-системы входят микропланшет c иммобилизованными моноклональными антителами к IgE, конъюгат стрептавидин-пероксидаза, концентрированный (х25) буфер для промывки, субстратный буфер TMБ, стоп-раствор (25% H3PO4);
• Набор калибровочных проб, в набор входит конъюгат анти-IgE-биотин, 6 калибраторов IgE человека (0.35, 0.7, 3.5, 17.5, 50, 100 МЕ/мл);
• Положительный контроль, 1 флакон х 1 мл;
• Отрицательный контроль, 1 флакон х 1 мл;
• Флаконы с биотинилированными жидкофазными аллергенами, каждый флакон одного наименования аллергена х 2,8 мл;
• Флаконы с рекомбинантными и нативными аллергенами, каждый флакон одного наименования аллергена х 2,8 мл.

Биотинилированные жидкофазные аллергены

Биотинилированные аллергены в жидкой форме используются для определения аллерген-специфических IgE-антител в реверсивном иммуноанализе REAST (энзим-аллергосорбентный тест с инвертированной последовательностью добавления реагентов). Перечень индивидуальных (моно) аллергенов охватывает более 770 наименований, во всех известных группах: пыльца деревьев и кустарников, луговые травы и злаки, сорные травы и цветы, лекарственные, плесневые и дрожжевые грибы, клещевые и домашней пыли, инсектные и яды насекомых, эпидермальные и белки животного происхождения, профессиональные, паразитарные, консерванты, пищевые и специи, что даёт уникальную возможность подбора аллергенов для каждого пациента индивидуально. Для скрининговых исследований предлагаются более 170 панелей микстов (смесей аллергенов). Аллергены поставляются во флаконах, объёма одного флакона достаточно для 25 определений одного наименования. Каталожные номера аллергенов определяются комбинацией код - № аллергена - FL. После вскрытия аллергены стабильны в течение всего срока годности составляющего два года и выше. Полный перечень биотинилированных моно и микстов аллергенов смотрите здесь.

Рекомбинантные и нативные аллергены

Исторически сложилось так, что в диагностике аллергии I типа использовались экстракты аллергенов, содержащие соответствующие главные и второстепенные аллергены, а также неаллергические компоненты. Эти экстракты превосходно подходят для первого скринингового тестирования пациентов, в настоящее время такие экстракты дополняются рекомбинантными или высоко очищенными нативными аллергенами, молекулярной аллергодиагностикой. Использование рекомбинантных или высоко очищенных нативных аллергенов представляет собой новый инструмент в области диагностики аллергии I типа, который даёт возможность получения более подробной информации о сенсибилизации и лечении пациентов. Полный перечень рекомбинантных и нативных моно и микстов аллергенов смотрите здесь.

Аналитические характеристики Specifi c IgE REAST

Оценка результатов: количественное в МЕ/мл и в классах от 0 до 6. Чувствительность: минимальная достоверно определяемая концентрация sIgE не превышает 0.35 МЕ/мл. Специфичность: отсутствие перекрёстных реакций антител к IgE c IgA, IgD, IgM и IgG. Стандартизация: стандарты прокалиброваны по Международному Стандарту ВОЗ для IgE IRP 75/502. Продолжительность исследования 3 часа, инкубационный период (60 мин/60 мин/30 мин/30 мин). Объем образца 50 мкл. Максимально широкая панель аллергенов, стабильных и готовых к применению. Готовые к использованию реагенты с цветной кодировкой. Аллергены, тест-системы и калибровочные пробы стабилизированы и сохраняют свою активность в течение срока годности, указанного на этикетке. Сроки годности до двух лет и выше. Система обнаружения (OD 450nm/620nm). Хранение при температуре 2-8°C. Маркировка CE (европейское соответствие). Измерение оптической плотности проводится на любом современном плашечном спектрофотометре вертикального сканирования, возможность использования автоматических ИФА анализаторов.

Информация для заказа

Тест-системы, набор стандартов, положительный контроль, отрицательный контроль, биотинилированные, рекомбинантные и нативные аллергены заказываются отдельно. Каталожные номера аллергенов определяются комбинацией <код - № аллергена - FL>. Дополнительно при работе с контролями необходимо заказать флакон аллергена d1-FL относительно которого стандартизированы контроли и который также заказывается отдельно. Полный перечень биотинилированных, рекомбинантных и нативных аллергенов смотрите в каталоге аллергенов.Каталог аллергенов