Набор Ro52 ELISA для определения двухцепочечной ДНК

Циркулирующие аутоантитела класса IgG к внутриклеточным структурам, в частности, к ядерным антигенам, являются характерной особенностью системных аутоиммунных заболеваний. Один из таких антигенов, Ro52, был недавно идентифицирован как RING-зависимая лигаза E3. Специфичные для Ro52 аутоантитела присутствуют у пациентов, страдающих системной красной волчанкой (SLE), синдромом Шегрена (SjS), смешанным заболеванием соединительных тканей (MCTD) и системной склеродермией (SSc). Ro52 вместе с Ro60 часто называют антигеном SS-A (антиген А синдрома Шегрена). Антитела анти-Ro52 часто сопровождаются антителами анти-La и анти-Jo-1. Кроме того, похоже, что антитела анти-Ro52 играют важную роль в развитии волчанки новорожденных и врожденной блокады сердца, особенно в случае направленности к определенным эпитопам Ro52. Примечательно, что распространенность анти-Ro52 при полимиозите (PM) и системной склеродермии (SSc) значительно выше по сравнению с другими антителами анти-Ro60. Поэтому требуется отдельное определение антител анти-Ro52 и анти-Ro60.

Описание Набор Ro52 ELISA каталожный номер 25006, предназначен для полуколичественного определения специфических антител для белка Ro52, методом твердофазного иммуноферментного анализа. Результаты теста помогают диагностировать системную красную волчанку (SLE), синдром Шегрена (SjS), системную склеродермию (SSc) и связанные аутоиммунные нарушения, указанные антитела следует использовать в качестве маркера, позволяющего прогнозировать течение заболевания.

Принцип работы набора

Метод - твердофазный иммуноферментный анализ. Поверхность лунок микропланшета покрыта слоем с рекомбинантной двухцепочечной ДНК. Сначала в микротитровальные лунки вносят разведённые образцы пациента, контроли и калибратор. Это приводит к связыванию антител к двухцепочечной ДНК с иммобилизованным антигеном двухцепочечной ДНК. После промывания добавляют конъюгат пероксидазы хрена (HRP) с антителами класса IgG, который связывается с антителами к двухцепочечной ДНК. Несвязанное вещество удаляется при проведении другого цикла промывания. В конце, связывание антител к двухцепочечной ДНК визуализируют посредством инкубации с субстратом ТМБ (тетраметилбензидин). Оптическую плотность измеряют спектрофотометрически на длине волны 450 нм.

Состав набора

Набор реагентов Ro52 ELISA на 96 определений. В набор входят стрипы для микротитрования с нанесенными антигенами, коньюгат пероксидазы хрена (HRP) с антителами класса IgG, промывочный буфер, ТМБ субстрат, стоп-раствор (0.5 M H2SO4), буфер для разведения, калибратор, отрицательный контроль, положительный контроль.

Аналитические характеристики набора

Широкий диапазон измерений с низкой границей обнаружения от 0.1 до 10 относительных единиц. Один калибратор для всех параметров. Рекомбинантный антиген. Продолжительность исследования < 1,5 часа, небольшой инкубационный период (30 мин/30 мин/15 мин). 3 мкл сыворотки или плазмы на каждый тест. Система обнаружения HRP/TMB (OD 450nm/620nm). Готовые к использованию реагенты с цветной кодировкой. Ломкие стрипы для микротитрования. Объём набора 96 определений. Хранение при температуре 2-8°C. Сроки годности до двух лет. Логотип CE.

Показатели результативности

Высокая корреляция с эталонными ИФА наборами и с помощью непрямого метода иммунофлюоресценции на субстрате Crithidia luciliae. Превосходное «lot to lot» (от партии к партии) соответствие R² > 0,95. Низкая вариативность в пределах и за пределами тестирования VK% < 10. Высокая линейность по всей области измерений.

Клинические значения

Наиболее часто антитела Ro52 обнаруживают у пациентов с синдромом Шегрена (Sjogren’s syndrome (от 40% до 80% случаев), но их выявляют также при системной красной волчанке (от 30% до 40% случаев) и при первичном билиарном циррозе (20%). Кроме этого, антитела к антигену SS-A могут быть найдены практически в 100% случаев красной волчанки новорожденных (neonatal lupus erythematosus). Они поступают через плацентарный барьер к плоду и являются причиной воспалительных реакций. У новорожденных они могут также вызывать врожденную блокаду сердца (congenital heart block). SS-A 52 - наиболее частое АНА, неспецифичный маркер большинства аутоиммунных заболеваний SS-A 60 - изолировано при СКВ, совместно SS-B - синдром Шегрена.